Beyoncé biểu diễn "Single Ladies" lần đầu tiên trong một buổi hòa nhạc tổ chức bởi đài Power 105.1 tại New York ngày 29 tháng 10 năm 2008.[72] Sau đó, Beyoncé tiếp tục biểu diễn bài hát trên các chương trình truyền hình, giải thưởng và tại các buổi hòa nhạc. Tại Giải Âm nhạc thế giới 2008 tổ chức tại Monaco, cô biểu diễn ca khúc với găng tay thuộc tính robot và cô đã chỉ vào găng tay khi hát phần điệp khúc.[73] Sau đó, Knowles biểu diễn lại "Single Ladies" trên chương trình Saturday Night Live (SNL) ngày 15 tháng 11 năm 2008.[74] Trong tối đó, Beyoncé cũng được mời trong phiên bản nhại lại của video âm nhạc với Justin Timberlake, Bobby Moynihan và Adam Samberg giả gái.[75] Ngày 16 tháng 11 năm 2008, Beyoncé đã biểu diễn phần kết hợp của ba bài hát "Crazy in Love", "If I Were a Boy" và "Single Ladies".[76] "Single Ladies" cũng đã được Beyoncé biểu diễn vào ngày 18 tháng 11 năm 2008 trên 106 & Park,[77] ngày 23 tháng 11 tại Giải Âm nhạc Mỹ 2008,[78] ngày 25 tháng 11 năm 2008 trên The Ellen DeGeneres Show[79] và ngày 26 tháng 11 ở Rockefeller Plaza cho chương trình Today của đài NBC.[80] Năm 2009, "Single Ladies" được Beyoncé biểu diễn trong chuyến lưu diễn hòa nhạc I Am... Tour và được bao gồm trong I Am... Yours. Vào 1 tháng 7 năm 2011, Beyoncé tiếp tục trình diễn "Single Ladies" trên chương trình Good Morning America.[81][82] Vào tháng 8 năm 2011, Beyoncé đã trình diễn lại bài hát ở Vũ trường Roseland tại Thành phố New York trước 3.500 người.[83][84] Vào ngày 3 tháng 2 năm 2013, tại hiệp giữa Super Bowl lần thứ XLVII, Beyoncé đã trình diễn lại "Single Ladies" cùng với hai thành viên cùng nhóm nhạc cũ Destiny's Child.[85]